動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一種多因素導(dǎo)致的慢性血管性疾病。AS是一個(gè)慢性炎癥過(guò)程，它可導(dǎo)致血管局部單核細(xì)胞浸潤(rùn)，促脂質(zhì)沉積，導(dǎo)致AS早期病變發(fā)生。研究認(rèn)為，血管內(nèi)皮受損是AS發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)，其中氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞促炎癥細(xì)胞因子和促炎癥分子表達(dá)的主要原因，在內(nèi)皮細(xì)胞損傷發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[1]。

　　[摘要]目的：研究牛樟芝對(duì)高脂血癥大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法：SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（N組）、模型組（M組）、牛樟芝低（AC-L）、中（AC-M）、高（AC-H）劑量組（250，500，1000mg・kg-1）。用高脂飼料喂養(yǎng)建立大鼠高脂血癥模型。10周給藥后，分別測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠血脂、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平，主動(dòng)脈血凝素樣氧化低密度脂蛋白（LOX-1）、P38絲裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白表達(dá)；電鏡觀察主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷情況。結(jié)果：M組血清膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量顯著升高（P<0.01），高密度脂蛋白（HDL-C）含量顯著降低（P<0.01）；與M組相比，AC-M和AC-H組內(nèi)皮損傷程度減輕，血清TC，TG，LDL-C含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），HDL-C含量升高但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血清SOD活性顯著增加（P<0.01，P<0.05），MDA和ox-LDL水平顯著減少（P<0.05或P<0.01），主動(dòng)脈LOX-1，P38MAPK，NF-κBmRNA和蛋白表達(dá)量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：牛樟芝可通過(guò)抑制主動(dòng)脈LOX-1，P38MAPK，NF-κB的表達(dá)，改善大鼠內(nèi)皮脂質(zhì)損傷，較好地保護(hù)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，免受脂質(zhì)氧化損傷。

　　[關(guān)鍵詞]中國(guó)醫(yī)學(xué)期刊網(wǎng),牛樟芝,SD大鼠,高脂血癥,內(nèi)皮損傷

　　目前，AS主要是靠藥物治療，牛樟芝（Antrodiacinnamomea，AC）作為一種真菌類中藥材，具有抗腫瘤、抗氧化、保肝、抗炎等功效[2]。目前，牛樟芝的效用在腫瘤及癌癥方面研究較為普遍，對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷研究甚少。本文旨在探討牛樟芝對(duì)高脂飲食大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷相關(guān)基因表達(dá)的影響，從而為進(jìn)一步明晰牛樟芝預(yù)防高脂飲食大鼠內(nèi)皮損傷的機(jī)制提供理論依據(jù)。

　　1材料

　　1.1藥物液態(tài)牛樟芝，上海市腫瘤研究所提供，使用時(shí)用0.9%的生理鹽水配置成25%的牛樟芝藥物溶劑。

　　1.2試劑與儀器超氧化物歧化酶和丙二醛測(cè)試盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；大鼠主動(dòng)脈LOX-1，P38MAPK，NF-κB酶聯(lián)免疫試劑盒（上海杰美GENMED醫(yī)藥科技有限公司）；Trizol核酸提取試劑、反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒和Real-timePCR試劑盒購(gòu)自Takara寶生物（大連）有限公司。HITACHI7170A全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；EL×800全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）；ABI7500熒光定量PCR儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）；DYY8C型電泳設(shè)備（北京市六一儀器廠）；電泳凝膠成像分析系統(tǒng)（英國(guó)Syngene公司）；SEM（S-4800）掃描電鏡（日本日立公司）。

　　1.3動(dòng)物清潔級(jí)雄性健康6周齡Sprague-Dawley大鼠50只，體重（220±20）g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（京）2006-0009。

　　2方法

　　2.1高脂血癥大鼠模型的建立及分組給藥方案將50只SD大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（N組）、模型組（M組）、牛樟芝低（AC-L）、中（AC-M）、高（AC-H）劑量組，每組10只。N組喂食基礎(chǔ)飼料，其余各組給予高脂飼料（78.8%基礎(chǔ)飼料、10%蛋黃粉、10%豬油、1%膽固醇、0.2%膽鹽）。造模同時(shí)，低、中、高劑量組每日以250，500，1000mg・kg-1牛樟芝溶劑灌胃，連續(xù)給藥10周。各組大鼠自由進(jìn)食和飲水，室溫（20±3）℃，濕度55%。每周日稱大鼠體重。

　　2.2血液和組織樣本采集第10周末，所有大鼠均禁食過(guò)夜。用2%戊巴比妥鈉（50mg・kg-1）腹腔注射麻醉。腹主動(dòng)脈取血，3000r・min-1離心10min，分離出血清分裝于Eppendorf管中，-20℃凍存待測(cè)。小心剝離大鼠腹主動(dòng)脈，剔除結(jié)締組織，切下1/3迅速置于10%中性多聚甲醛溶液中固定，其余部分迅速置于液氮中冷凍，并于-80℃超低溫冰箱保存待測(cè)。

　　2.3血脂指標(biāo)和血清相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量；分光光度比色法測(cè)定血清中超氧化物歧化酶（SOD）的含量；TBA法測(cè)定血清中丙二醛（MDA）的含量。所有操作均嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

　　2.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)主動(dòng)脈LOX-1，P38MAPK，NF-κBmRNA表達(dá)量Trizol試劑提取主動(dòng)脈組織總RNA，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟，獲得cDNA產(chǎn)物，并進(jìn)行PCR反應(yīng)，β-actin為內(nèi)參。引物序列檢索自NCBI-Nucloetide數(shù)據(jù)庫(kù)，采用Primesr5.0軟件設(shè)計(jì)，引物由上海生工生物公司合成。LOX-1，P38MAPK，NF-κBmRNA表達(dá)分析采用Real-timePCRSYBGreen熒光染料法測(cè)定，配置20μL體系，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)。循環(huán)條件為：預(yù)變性95℃30s；PCR反應(yīng)95℃5s，60℃34s（共40循環(huán)），95℃15s，60℃1min，95℃15s。β-actin上游引物TGTGAAATAGGGGCTGTG，下游引物GGAAGAGGGAAGAACTGG；LOX-1上游引物AAAAAGTCGGGAGAATTGCCTATC，下游引物CCGGGTTTTTGCTTCTGGTCTT；P38MAPK上游引物TTGGTCTGTTGGATGTGTTTAC，下游引物TGGATTATGTCAGCCGAGTG；NF-κB上游引物ATCTGTTTCCCCTCATCTTTCC，下游引物TGGGTGCGTCTTAGTGGTATCT。軟件自動(dòng)生成擴(kuò)增曲線及融解曲線。2-ΔΔCt值法計(jì)算mRNA表達(dá)水平。本實(shí)驗(yàn)提示，牛樟芝可以降低高脂飲食大鼠的體重及血清TC，TG，LDL-C含量，同時(shí)能夠改善內(nèi)皮損傷癥狀。牛樟芝對(duì)機(jī)體主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的改善作用可能是通過(guò)減少脂質(zhì)過(guò)氧化的中間產(chǎn)物MDA，抑制ox-LDL生成，使LOX-1，P38MAPK，NF-κB表達(dá)降低來(lái)實(shí)現(xiàn)。

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