藍(lán)莓是一種是低灌木，矮腳野生，顆粒小，含豐富花青素；第二種是人工培育藍(lán)莓，能成長(zhǎng)至 240cm 高，果實(shí)較大，果肉飽滿，改善了野生藍(lán)莓的食用口感，增強(qiáng)了人體對(duì)花青素的吸收。本文是一篇農(nóng)藝師論文范文，主要論述了藍(lán)莓外植體消毒的幾種方法對(duì)比研究。

　　摘要：通過(guò)對(duì)比不同種類消毒劑、不同消毒時(shí)間對(duì)藍(lán)莓莖段消毒效果，以篩選出最適合藍(lán)莓消毒的方法，結(jié)果表明，最適合藍(lán)莓外植體消毒的方法：0.1%HgCl2浸泡9min。本研究結(jié)果將為藍(lán)莓外植體消毒提供借鑒。

　　關(guān)鍵詞：藍(lán)莓,外植體,消毒

　　藍(lán)莓，杜鵑花科，越桔屬，多年生灌木小漿果果樹(shù)。藍(lán)莓果實(shí)中花青素、多酚等抗氧化物質(zhì)的含量很高(楊紅澎，2010)，能使心血管的功能有所改善，積累的膽固醇的量有所下降。一些專家學(xué)者為了產(chǎn)業(yè)化快速培育藍(lán)莓種苗，已經(jīng)開(kāi)展了對(duì)其組織培養(yǎng)體系的研究(劉太林，2012)。

　　1.材料與方法

　　1.1供試材料

　　組培所用的藍(lán)莓枝條為半高叢藍(lán)莓北藍(lán)品種，于2014年5月采自于遼寧林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院藍(lán)莓實(shí)驗(yàn)基地。

　　1.2材料處理

　　將休眠植株的木質(zhì)化枝條沖洗干凈，插于水桶中放在25℃的溫室中，每天換1次清水。1周后枝條頂芽和上部側(cè)芽陸續(xù)伸長(zhǎng)，新葉逐漸展開(kāi)。2～3周時(shí)采取新抽出的嫩枝為外植體。

　　1.3外植體表面消毒

　　剪取藍(lán)莓嫩枝條，用自來(lái)水沖洗干凈，并加少量洗衣粉洗滌，攪動(dòng)5min，再用自來(lái)水沖洗約60min，剪成約1～2cm的小段。用70%酒精、含1%吐溫80的0.75%次氯酸鈉溶液和0.1%升汞溶液及不同的消毒時(shí)間組合，對(duì)莖段進(jìn)行消毒處理，共設(shè)計(jì)了9種對(duì)藍(lán)莓莖段的消毒試驗(yàn)方案：分別以70%酒精、0.75%NaCIO、0.1%HgCl2各消毒7、9、11min。消毒時(shí)不斷搖動(dòng)，消毒后的莖段用無(wú)菌水沖洗4次，吸干水分，再用無(wú)菌紙瀝干備用。切去基部受損組織，按無(wú)菌操作要求接種于培養(yǎng)基上，觀察在不同消毒時(shí)間內(nèi)使用不同消毒劑后的消毒效果。

　　1.4數(shù)據(jù)處理

　　依據(jù)上述辦法進(jìn)行藍(lán)莓接種，每種消毒方式接種3次，記錄消毒效果。

　　污染率=(外植體中染菌的數(shù)量/所有接種的外植體總數(shù))×100%

　　死亡率=[(死亡的外植體數(shù)量+愈傷失敗的外植體數(shù)量)/接種外植體的總數(shù)]×100%

　　2.結(jié)果與分析

　　通過(guò)統(tǒng)計(jì)方法，可以計(jì)算出藍(lán)莓外植體的污染率和死亡率(周歷萍等，2011)，污染率分別為96.70%、86.70%、83.30%、93.70%、90.00%、80.00%、66.70%、43.30%、53.30%;所對(duì)應(yīng)的死亡率分別為0、0、3.30%、3.30%、0、3.30%、0、0、6.70%。因此，在此試驗(yàn)中，最適合藍(lán)莓外植體消毒的方法：0.1%HgCl2浸泡9min，可為藍(lán)莓組織培養(yǎng)的研究提供理論依據(jù)。

　　從結(jié)果中我們不難看出，所選消毒時(shí)間在外植體能承受的范圍內(nèi)，單一的處理時(shí)間越長(zhǎng)，效果越好，污染率越低。但0.1%HgCl2毒力強(qiáng)，對(duì)植物材料殺傷性較強(qiáng)，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，容易對(duì)植物材料造成損失。除第7種處理方式外，各消毒劑中，0.1%HgCl2因其在短時(shí)間內(nèi)可對(duì)外植體表面菌起到毒害作用，因而消毒效果要好于70%酒精。70%的酒精也有較強(qiáng)滲透力，通過(guò)很快穿入植物體內(nèi)毒害外植體表面菌，消毒的效果要比次氯酸鈉明顯。而2%次氯酸鈉最差，2%次氯酸鈉消毒7min的消毒效果遠(yuǎn)不及其他處理方式的消毒效果，污染率最高;0.1%HgCl2消毒9min的消毒效果最好，最終成為此次試驗(yàn)藍(lán)莓外植體消毒方法。

　　3.討論

　　陶興魁等(陶興魁等，2013)研究表明：“一般而言，菌類污染污染率應(yīng)控制在8%以內(nèi)，消毒劑的使用既要能夠把外植體上的病菌殺滅，又必須容易被無(wú)菌水從外植體上沖洗掉或自行分解而不至于對(duì)外植體本身產(chǎn)生毒害作用，影響其生長(zhǎng)。0.1%的升汞因其有劇毒，且消毒后難以除去殘余的汞，對(duì)外植體有殺傷作用，所以使用后要應(yīng)用大量無(wú)菌水沖洗多次，減少其對(duì)植物的毒害作用。2%NaClO容易清洗，但同時(shí)對(duì)外植體上的病菌的殺害作用也隨之減少。70%酒精滲透力很強(qiáng)，在短時(shí)間內(nèi)便可進(jìn)入植物細(xì)胞行使其毒力作用，所以應(yīng)用酒精消毒一般是在15～30s之內(nèi)，即便這樣，也可能會(huì)造成外植體一定的死亡率。”

　　在消毒過(guò)程中，消毒劑具有很強(qiáng)的殺傷力和穿透力，容易殺死或損失植物細(xì)胞，造成外植體長(zhǎng)勢(shì)不良，因此在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，要盡量降低污染率，同時(shí)還要盡可能減少消毒劑對(duì)外植體的傷害。

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